تشخیص ویروس زبان آبی توسط روش RT-PCR در گوسفند

طی سال 87-1386 تعداد 120 نمونه خون از گوسفندانی که دارای علائم بالینی مشکوک به زبان آبی بودند، اخذ گردید. نمونه ها از کانون هائی که از نظر سرولوژیک وجود ویروس در آنها اثبات شده بود جمع آوری گردید. پس از جداسازی سرم، توسط الیزای رقابتی آنتی بادی ضد آنتی ژن VP7 در آنها ردیابی گردید. کل ژن S7 بطول 1156bp توسط RT-PCR one step و با استفاده از دو زوج پرایمر اختصاصی مکمل انتهای 3 و 5 قطعه مذبور تکثیر یافت. در تعداد قابل توجهی از نمونه ها باند 1156bp بشکل ضعیف یا غیرواضح مشاهده شد. برای رفع این مشکل از آزمایش nested-PCR با بکارگیری پرایمرهای داخل ژن S7 استفاده گردید. باند حاصل قطعه ای بطول 769bp بود. به این وسیله علاوه بر تأیید نتایج PCR اول حساسیت شناسای ویروس افزایش یافت. از بین نمونه های مورد آزمایش، 41 مورد (34/2 درصد) از نظر وجود آنتی بادی ضد گروه سرمی زبان آبی، 23 مورد (19/2 درصد) از نظر nPCR، 12 مورد (10 درصد) از نظر الیزا و nPCR مثبت و 56 مورد (46.6 درصد) از نظر الیزا و nPCR منفی تشخیص داده شدند. این مطالعه اولینگزارش در خصوص بکارگیری RT-PCR جهت شناسایی ویروس زبان آبی در ایران است. از RT-PCR و nestedPCR به عنوان یک روش بسیار حساس مولکولی جهت شناسایی ویروس زبان آبی در نمونه های خون می توان بهره برد.

کلیدواژه ها:

ویروس زبان آبی ، nested-PCR ، RT- PCR و الیزای رقابتی