شناسایی سریع باکتری ویبرکلرا با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه (Hexaplex PCR)

مقدمه: ویبریوکلرا (عامل بیماری وبا) یک پاتوژن مهم در بروز بیماری اسهال در بخش های گسترده ای از آسیا و آفریقا است. این باکتری یک پاتوژن روده ای است که می تواند سبب بروز بیماری همه گیر گردد. در نتیجه تشخیص سریع، حساس و اختصاص ویبریو کلرا، مورد توجه اکثر آزمایشگاه های تشخیصی است. هدف از این پژوهش، طراحی و توسعه یک روش سنجش سریع ژنوم باکتری ویبریوکلرا بر اساس واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه (Hexaplex PCR) است. مواد و روش ها: پرایمر جهت شناسایی شش ژن بیماری زا و تنظیمی از باکتری ویبریوکلرا انجام شد. ژن های مذکور شامل ژن های کلراتوکسین زیرواحدهای A و (B(ctxA, ctxB توکسین zot، انتروتوکسین کلرا (ace)، توکسین تنظیمی (tcp) و پروتئین غشاء خارجی (omp W) است. ژنوم نمونه استاندارد، با استفاده از پرایمرهای مذکور در واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه، مورد مطالعه قرار گرفت. همچنین حساسیت و اختصاصیت سنجش مذکور نیز ارزیابی شد. یافته ها: انجام PCR شش تایی، حضور ژن های بیماری زا و تنظیمی باکتری ویبریوکلرا را در نمونه استاندارد نشان داد. همچنین نتایج بیانگر اختصاصیت مناسب روش بوده و حساسیت آن تا حدود cfu100 از باکتری محاسبه گردید. نتیجه گیری: از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه می توان برای طراحی کیت تشخیصی عامل بیماری وبا استفاده نمود.

کلیدواژه ها:

ویبریوکلرا ، PCR ، شناسایی ، حساسیت ، اختصاصیت