تشخیص تفریقی گوشت خام گاو، گاومیش، اسب و الاغ با استفاده از PCR و PCR-RFLP

تشخیص تفریقی گوشت حیوانات مختلف به دلایل اقتصادی، مذهبی و حفظ سلامت عمومی از اهمیت برخوردار است. از جمله روشهای مورد استفاده در این زمینه روشهای مولکولی مانند PCR و PCR-RFLP می باشد. هدف از انجام این تحقیق بررسی امکان تشخیص تفریقی گوشت گاو، گاومیش است. اسب و الاغ با استفاده از روشهای مولکولی بوده است. در این راستا دو سیاست کلی به کار گرفته شد. در روش اول توالی 597 جفت باز از ژن سیتوکروم b با استفاده از پرایمرهای مشترک GCYR و GCYF تکثیر شد. محصولات PCR که در مورد تمام گونه ها هم اندازه بودند، پس از تخلیص با استفاده از روش RFLP و با کمک آنزیم های محدود کننده Alul و BamHI و HaeIII و Rsal و Xbal به صورت تکی و با ترکیبی از یکدیگر تفریق شدند. در سیاست دوم با استفاده از پرایمر اختصاصی گونه ای، توالیهایی از ژن سیتوکروم b با طولهای متفاوت در هر گونه تکثیر شد. از این اختلاف جهت تمایز 4 گونه استفاده شد. در این تحقیق با استفاده از ترکیبهای مختلف از آنزیمهای محدود کننده، گوشت هر 4 گونه مورد نظر از یکدیگر تفریق شدند. گوشت 4 گونه مورد نظر همچنین با استفاده از پرایمرهای اختصاصی حتی در مقادیر بسیار پایین یک و نیم درصد از DNA یک گونه به ترتیب در 99 و 99/5 درصد از DNA سایر گونه ها تشخیص داده شد به علاوه با انجام Multiplex PCR روی DNA خالص هر گونه و با استفاده از ترکیب هم زمان پرایمرهای اختصاصی هر 4 گونه، DNA گونه مورد نظر شناسایی شد. در این تحقیق واکنش متقاطع بین DNA انسانی و پرایمرهای مشترک و اختصاصی گونه ها نیز بررسی شد و هیچ واکنش متقاطعی مشاهده نگردید. همچنین هیچ واکنش متقاطعی بین DNA یک گونه و پرایمرهای اختصاصی دیگر گونه ها دیده نشد.

کلیدواژه ها:

گوشت ، گاو ، گاومیش ، اسب ، الاغ ، RFLP ، PCR