اندازه گیری Factor-? Tumor Necrosis مترشحه از سلولهای HL-60, U937: معیاری جهت ارزیابی آلودگیهای اندوتوکسین

لیپوپلی ساکاریدهای باکتریهای گرم منفی (اندوتوکسین) یکی از عوامل مهم تب زا و ایجاد شوک عفونی در انسان و سایر پستانداران می باشد. لذا ارزیابی عدم آلودگی به اندوتوکسین محصولات دارویی و غذایی به خصوص داروهای پروتئین نوترکیبی در بیوتکنولوژی بسیار حائز اهمیت می باشد. اندازه گیری اندوتوکسین بیشتر بر اساس روش استفاده از ایجاد تب در خرگوش و یا روش ایجاد لخته یا Limulus ameoboycyte lysate (LAL انجام می گیرد. با توجه به هزینه بالای اقتصادی این روش ها و محدودیت اخلاقی روش تب زایی در خرگوش دراین طرح از خصوصیت اندوتوکسین در تحریک سلولهای میلوئید انسانی و اندازه گیری میانجی های آزاد شده به عنوان معیاری از تحریک با اندوتوکسین استفاده شده است. بدین منظور رده های سلولی میلوئید انسانی HL-60 و U937 (تمایز نیافته و تمایز یافته با PMA, Retionic acid, GM-CSF, Vit D3) و نوتروفیلها و لکوسیتها تک هسته ای خون محیطی انسان با غلظت های 0.01ng to 10 µg/ml اندوتوکسین به مدت 15 دقیقه تا 24 ساعت تیمار شدند سپس سلولها و محیط رویی سلولها به طور جداگانه جمع آوری و اثرات اندوتوکسین در رشد سلولها و میزان سنتز و ترشح TNF-α به روش کیفی و کمی ELISA اندازه گیری شد. نتایج حاصل به طور خلاصه به شرح زیر می باشد:اندوتوکسین در سلولهای HL-60 و U937 رشد سلولها را در مقایسه با سلولهای کنترل مهار می کند و این مهار همراه با آزاد شدن آنزیم لاکتات دهیدروژناز از این سلولها و به واسطه سمیت سلولی می باشد. تولید و ترشح TNF-α که به روش کیفی سمیت سلولی در سلولهای L929 و به صورت کمی ELISA اندازه گیری شد و نتایج نشاندهنده افزایشی بیش از 10 برابر را نسبت به سلولهای کنترل می باشد.