بهینه سازیWestern Blot و DIBA به منظور تایید بیان ژن پروتئین پوششی ویروس برگ بادبزنی مو در E.coli

اساس روشهای immunoblotting ازجملهWestern blot و DIBA(Dot-immunobinding assay) انتقال پروتئین به یک غشای جاذب و ردیابی پروتئین مورد نظر با استفاده از آنتی بادیهای اختصاصی و مورد نیاز میباشد. در تحقیق حاضر، به منظور تایید بیان ژن پروتئین پوششی ویروس برگ بادبزنی مو (GFLV) پس از استخراج پروتئین بیان شده از باکتری،آزمون دیبا انجام شد. در این آزمون لکه گذاری استفاده از پروتئین استخراج شدهی باکتری روی کاغذ نیتروسلولزی و آشکار سازی آن با استفاده از آنتی بادی اختصاصی حاکی از وجود پروتئین پوششی GFLV در پروتئین استخراج شده ازسوسپانسیون باکتریایی بود. روش دیبا در واقع یک بررسی اولیه برای وجود پروتئین و بهینه سازی رقتهای مناسب آنتی بادی در ردیابی پروتئین میباشد. همچنین پس از الکتروفورز در ژل پلی آکریلآمید حاوی سدیم دودسیل سولفات (SDS-PAGE) باندهای پروتئین به غشای نیتروسلولزی منتقل شدند و با استفاده از آنتی بادی مخصوص پروتئین پوششی GFLV کانجوگیت اختصاصی با رقت های مناسب آشکارسازی باند مورد نظر در غشا نیتروسلولزی انجام گرفت. منطبق بودن نتایجحاصل از الکتروفورز در ژل پلی آکریلآمید، دیبا و نهایتاً وسترن بلات نشان از وجود پروتئین مورد نظر در پروتئین استخراجشده از سوسپانسیون باکتریایی بود. پروتئین، پلیآکریلآمید، دیبا، وسترن بلات

کلیدواژه ها:

پروتئین ، پلیآکریلآمید ، دیبا ، وسترن بلات