تولید پروتئین اینترفرون آلفاb 2 انسانی در سیستم بیانی اشرشیاکلی

اینترفرو نها وسیله دفاعی بدن علیه ویرو سها می باشند که به سرعت در بدن تولید شده، سلولهای اطراف را به تولیدپروتئی نهائی که تکثیر ویروس را مهار، یا پاسخ ایمنی و رشد سلولی را کنترل می کنند، تحریک می کنند. در این پژوهش، ژن اینترفرون آلفا2b پس از تکثیر با آغازگرهای اختصاصی در ناقل بیانی pET-26b(+)تحت کنترل پروموتور T7 و پپتید نشانه پریپلاسمیpelBو با استفاده از آنزی مهای برشیNcoIو XhoIکلون گردید. سازه تهیه شده به باکتری اشرشیاکلی سویه BL21(DE3)منتقل گردید. همسانه سازی ژن اینترفرو نآلفا در ناقل بیانی pET-26b(+)با استفاده از،Colony PCRهضم آنزیمی و تعیین توالی، تأیید شد. سپس بیان ژن اینترفرو نآلفا با استفاده از آنالیز بلات نقطه ای در فضای پریپلاسمی و بصورتآنزیمی و تعیین توالی، تأیید شد. سپس بیان ژن اینترفرو نآلفا با استفاده از آنالیز بلات نقطه ای در فضای پریپلاسمی و بصورتIPTGمورد بررسی قرار گرفت. با استفاده از این روش مشخص شد کهاینترفرون آلفا2b در سیستم بیانی باکتری تولید شده و وارد فضای پریپلاسمی باکتری شده است. با انجام این تحقیق با هدف بهینه کردن تولید اینترفرو نآلفا در باکتری اشرشیاکلی، می توان زمینه را برای تولید سایر پروتئین ها فراهم کرد. تولید این پروتئین سلولی مهم در آزمایشگاه، کاربردهای مهمی را در تولید پروتئین های نوترکیب دارویی خواهد داشت.

کلیدواژه ها:

اینترفرون آلفا ، pET-26b (+) ، 2b ، pET-26b (+) ، 2b IPTG