ساب کلونینگ کاست ژنی RTB-IpaD به عنوان کاندید واکسن علیه بیماری شیگلوزیز

یکی از راه های تقویت اثر واکسن های خوراکی استفاده از ادجوانت ها می باشد. RTB دارای نقش ادجوانتی و حاملی بوده و می توان با ممزوج کردن آنتی ژن های کاندیدای واکسن با این ادجوانت به تولید واکسن خوراکی مناسب پرداخت. IpaD نقش مهمی در بیماری زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلا دارد. هدف از این مطالعه، ساب کلونینگ کاست ژنی RTB - IpaD به عنوان کاندید واکسن علیه بیماری شیگلوزیز و بررسی بیان آن در درسویه Rosetta اشرشیاکلی می باشد. کاست ژنی RTB - IpaD دارای لینکر غیر فورینی با آنزیم برشی HindΙΙΙ وSalΙ مور د هضم آنزیمی قرار گرفت و در وکتور بیانی pET-28a(+) زیرهمسانه سازی شد و عمل ترانسفورماسیون به درون سلول Rosetta انجام گرفت و در ادامه تحت القای IPTG بررسی بیان پروتئین صورت گرفت. صحت کار با انجام PCR وهمچنین برش آنزیمی بر روی پلاسمید های نوترکیب pET-28a(+) و با انجام الکتروفورز مورد تایید قرار گرفت. آنالیز تعیین توالی نشان داد که کاست ژنی مورد نظر به درستی کلون شده است. با توجه به نقش ناحیه -N ترمینال ژن IpaD که یک ایمنوژن بسیار قوی و یک ناحیه عملکردی بسیار مهم در بروز شیگلوز می باشد می توان این آنتی ژن را با ایمنوادجوانت RTB ممزوج نموده و در میزبان های مختلف مورد مطالعه قرار داد. پروتئین های تولید شده می تواند به عنوان کاندید واکسن علیه بیماری شیگلوزیز استفاده شود.

کلیدواژه ها:

شیگلوز ، RTB ، IpaD