همسانه سازی پیشبر E8 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

برای رسیدن به سطح بالایی از رونویسی و قدرت بیان، پیشبرها عنصر کلیدی هستند. پیشبر E8 یک پیشبر ویژه بافت میوه گیاه گوجه فرنگی می باشد. E8 یک ژن مرتبط با بیوسنتز اتیلن است. پروتئین E8 عضوی از خانواده دی اکسیژنازها و مربوط به 1- آمینو سیکلوپروپان 1- کربوکسیلیک اکسیداز است که مرحله آخر مسیر بیوسنتز اتیلن را کاتالیز میکند. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه گوجه فرنگی و تکثیر پیشبر E8 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی با آنزیم pfu پلیمراز، همسانه سازی شد. قطعه مورد نظر با دو آنزیم برشی BamH1 و HindIII جداسازی و خالص سازی شد وجایگزین پیشبر دایمی CaMV35S در ناقل دوگانه pBI121 گردید. پلاسمید نوترکیب به روش شوک حرارتی به Agrobacterium tumefaciens سویه LBA4404 منتقل گردید. با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن بیان اختصاصی ژن gus در بافت های گیاه گوجه فرنگی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل بیان اختصاصی ژن را تایید کرد.

کلیدواژه ها:

اگرواینفیلتریشن ، بیان موقت ، پیشبر E8 ، همسانه سازی