طراحی ، کلونینگ و بیان داربوپوئتین در Leishmania tarentolae
سال انتشار: 1392
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 568
فایل این مقاله در 5 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
NBCI08_0422
تاریخ نمایه سازی: 29 شهریور 1394
چکیده مقاله:
زمینه و هدف: داربوپوئتین واریته مهندسی شده ای از اریتروپویتین می باشد که دارای دو جایگاه N- گلیکوزیلاسیون اضافی در اسید آمینه های 30 و 88 شده است. این پروتئین تغییر یافته دارای نیمه عمر سرمی 3 برابر و فعالیت بیولوژیک بیشتر نسبت به اریتروپویتین بوده وهدف از این تحقیق، افزایش بازده تولید داربوپوئتین بواسطه بیان در لیشمانیا تارانتولا (Leishmainiatarentolae) می باشد. روش ها: ژن داربوپوئتین باکمک دانش بیوتکنولوژی مولکولی طراحی، بهینه سازی ازنظر توالی کدونی و سپس توسط استراتژی برش در وکتور بیانی pLEXSY کلون گردید. تایید کلونی های ترانسفکت شده با استفاده از روش PCR با پرایمرهای تشخیصی سازه بیانی و پرایمرهای مخصوص داربوپوئتین انجام گرفت. القاء ژن داربوپوئتین کلون شده توسط تتراسایکلین انجام شد و بیان ژن با دو تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ آنالیز گردید. نتایج: آنالیز بیان ژن در سوش ترانسفکت شده توسط SDS-PAGE تاییدکننده ورود سازه ژنی به کروموزم انگل و بیان داربوپوئتین بودند. بهترین شرایط بیان، 10 میکروگرم تتراسایکلین و زمان القاء 72 ساعت بدست آمد. بحث و نتیجه گیری: در مجموع، سازه بیانی جهت بیان ژن داربوپوئتین در لیشمانیا تارانتولا طراحی و ساخته شد و پروتئین مذکور با موفقیت القاء گردید. هم اکنون مراحل بعدی پروژه به منظور ارزیابی عملکرد داربوپوئتین تولید شده در میزبان انگلی در حال انجام می باشد.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
انورسادات کیان مهر
گروه تحقیقات ژنتیک و متابولیسم
حمید شهباز محمدی
گروه تحقیقات ژنتیک و متابولیسم
محمد علی شکرگزار
گروه تحقیقات فناوری های نوین- انستیتوپاستور ایران
فریدون مهبودی
گروه تحقیقات فناوری های نوین- انستیتوپاستور ایران
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :