اRefolding و تخلیص همزمان آنزیم نوترکیب پرولین دهیدروژناز درسامانه های دوفازی آبی

زمینه وهدف: پرولین دهیدروژناز عضوی از خانواده فلاوآنزیم ها می باشد که نقش مهمی را درمسیر متابولیسم پرولین به گلوتامات ایفا می نماید. دراین مطالعه، استفاده از سامانه های دوفازی آبی به عنوان یک روش جدید جهت refolding و تخلیص همزمان آنزیم نوترکیب پرولین دهیدروژناز از اجسام این کلوژن ارائه شد. روش ها: refolding و تخلیص پرولین دهیدروژناز نوترکیب درسامانه های دو فازی آبی متشکل ازپلی اتیلن گلیکول و کربنات سدیم بررسی شد. اثر پارامترهایی مانند نوع نمک و غلظت کلرید سدیم بر تفکیک آنزیم هدف مورد بررسی قرار گرفتند. صحت خالص سازی آنزیم نوترکیب نیز توسط الکتروفورز SDS-PAGE آزمایش شد. نتایج: بالاترین بازده (63/09 درصد) و فاکتور تخلیص (26/94) درسامانه دوفازی حاوی 14 درصد پلی اتیلن گلیکول 1000 دالتون و 12درصد کربنات سدیم حاصل شد. آنزیم نوترکیب در فاز بالایی غنی از پلی اتیلن گلیکول تخلیص شد و افزایش غلظت کلرید سدیم باعث کاهش موثر تفکیک آنزیم پرولین دهیدروژناز گردید. وزن مولکولی آنزیم با استفاده از SDS-PAGE در حدود 40kDa تخمین زده شد. فعالیت ویژه ی پرولین دهیدروژناز تخلیص شده در این مطالعه 1200U/mg به دست آمد. بحث و نتیجه گیری: درمجموع، نتایج بدست آمده، تایید کردند که سامانه های دوفازی آبی پلی اتیلن گلیکول و کربنات سدیم می تواند به عنوان یک تفکیک تلفیقی جهت انجام refoldingو تخلیص همزمان پرولین دهیدروژناز نوترکیب از اجسام این کلوژن مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

سامانه های دوفازی آبی ، refolding ، پرولین دهیدروژناز ، تخلیص