بهینه سازی بیان موقت ژن در گیاه اسنفناج به روش آگرواینجکشن با حامل ویروسی PVX

پروتئین فلور سنت سبز به عنوان ژن گزارشگر ایده آل در مهندسی ژنتیک به منظور بهینه سازی سیستم انتقال ژن و بیان آن کاربرد فراوان دارد . در این تحقیق بهینه سازی سیستم بیان موقت در گیاه Spinaciaolerace با استفاده از زن گزارشگر GFP توسط وکتور ویروسی انجام گرفت . برای این منظور ژن تقویت شده (Egfp) از وکتور گیاهی غیر ویروسی PK7WG2D,1 با طراحی آغاز گرهای مناسب با توجه به توالی های دو انتهای ژن ،محل های برشی مناسب، تکثیر و پس از جداسازی ، در ناقل بیانی PVX همسانه سازی شد . به منظور اطمینان از همسانه سازی، سازه تهیه شده با استفاده از بررسی های کلونی PCR، PCR و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت . سازه نهائی pVX-Egfp تایید شده خاوی ژن Egfp به روش شوک حرارتی به باکتری آگروباکتریوم سویه GV3101 منتقل گردید و در مرحله آخر انتقال آگروباکتریوم نوترکیب به روش Agroinjection به گیاه اسفناج صورت گرفت . بیان موقت پروتئین در برگ های اسفناح توسط نور فلورسنس دیده شد .

کلیدواژه ها:

بیان موقت ، ناقل ویروسی موزاییک X سیب زمینی - اسفناج