بررسی واکنش (Real-time PCR) برای سنجش mRNA

؛Real-time PCR مشاهده لحظه به لحظه یک فرآیند، یکی از گسترده ترین شیوه های سنجش کمی ژن می باشد، زیرااین روش طیف وسیعی دینامیکی دارد، دارای حساسیت فوق العاده ای است، می تواند توالی بسیار خاص ی را دارا باشد،پردازش پس از تقویت آن کم بوده و یا اصلاً وجود ندارد و متمایل به افزایش توان نمونه است. با این حال، سود مطلوبحاصل از این مزایا نیازمند درک روشنی از اختیارات بسیار زیاد و در دسترس بودن آن، جهت اجرای آزما یش PCRمی باشد. این بررسی که با تئوری پشت PCR آغاز می کند، بر روی مولفه های کلیدی آزمایش PCR بحث می نماید. ازجمله PCR یک مرحله ای یا دو مرحله ای، سنجش کمی مطلق در مقابل سنجش کمی نسبی، مدل های ریاضی موجودبرای سنجش کمی نسبی و محاسبات افزایش بهره وری، انواع نرمال شدن و یا اصلاح داده ها، و تشخیص علوم شیمی. اینروش بر مبنای فلوروسنت تولیدی از مولکول گزارشگر میباشد که در طول واکنش افزایش مییابد. مولکولها ی گزارشگرفلوروسنت یا به صورت رنگهایی میباشند که به DNA دو رشته ای باند میشوند مانند SYBR Green و یا بصورتشناساگرهای توالیهای خاص مانند TaqMan Probes می باشند. این تکنیک می تواند با حداقل اسید نوکلئیک آغازشود و مقدار تولید نهایی را با دقت زیادی تعیین نماید. محدود به زمان و ذخیره منابع نمی باشد، به راحتی قابل اجرا استو دقت و حساسیت بالاتر از PCR معمولی دارد. این روش توانایی تشخیص بسط PCR را در مرحله اولیه واکنش دارد درحالی که تشخیص در PCR معمولی در مرحله نهایی واکنش می باشد.

کلیدواژه ها:

سنجش کمی مطلق ، سنجش کمی نسبی ، مولکول گزارشگر ، فلورسنت ، شناساگر