کلونینگ آنزیم حاوی برچسب هیستیدین بتا-زایلوزیداز Selenomonasruminantium در مخمر

مقدمه: همی سلولزها (زایلان ها، آرابینوزایلان ها) که از اجزای ساختاری در دیواره سلول های گیاهی می باشند، دومین کربوهیدرات های پلیمری (پلی ساکارید های) فراوان در روی زمین محسوب می گردند که فراوان ترین آنها، زایلان می باشد. بتا-زایلوزیدازها ( EC 3.2.1.37 ) از خانواده گلیکوزیدازها بوده که حذف متوالی بقایای بتا- زایلوزیل را از انتهای غیر احیا کننده ی زایلوبیوز و زایلوالیگوساکاریدهای خطی با پیوندهای β-1,4 انجام داده و به طور پیوسته با بتا-زایلانازها، برای دپلیمریزه کردن کامل زایلان ضروری می باشند. هدف:کلونینگ و افزودن توالی شش آمینواسیدی هیستیدین به ژن نوترکیب بتا-زایلوزیداز در باکتری اشرشیاکلی و سپس مخمر صنعتی پیکیاپاستوریس به منظور خالص سازی آنزیم تولید شده پس از بیان در این میزبان می باشد. روش مطالعه:توالی پروتئینی آنزیم بتا- زایلوزیدازباکتری Selenomonasruminantium از بانک های اطلاعاتی پروتئین استخراج شده و با توجه به ترجیح کدونی پیکیاپاستوریس، توالی ژن طراحی و سنتز شد. با طراحی پرایمرهای مناسب توالی حاوی شش هیستیدین به ژن مورد نظر داخل وکتوردوگانه ی pPink-HC اضافه گردیده و سپس با استفاده از روش الکتروپوریشن به مخمر انتقال یافت. یافته ها: سازه نوترکیب حاوی ژن بتا-زایلوزیداز به همراه توالی حاوی شش هیستیدین تولید گردید. با استفاده ازروش های هضم آنزیمی و PCR حضور ژن ترانسفورم شده به باکتری و مخمر تا یید شد. بحث و نتیجه گیری:کلونینگ موفق ژن بتا-زایلوزیداز باکتریایی حاوی برچسب شش هیستیدین در باکتری اشرشیاکلیو مخمر به منظور بیان در مخمر صنعتی پیکیا پاستوریس و سپس خالص سازی این آنزیم انجام شد.

کلیدواژه ها:

همی سلولز ، مخمر ، بتا-زیلوزیداز ، برچسب هیستیدین ، کلونینگ