تخلیص آنزیم لیپواکسیژناز از تخم کتان با استفاده از کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون

در این مطالعه، به جداسازی و تخلیص آنزیم لیپواکسیژناز از تخم کتان (Linumusitatissimum) پرداخته شد. آنزیم تولید شده پس از رسوب دهی با نمک سولفات آمونیوم، با استفاده از کروماتوگرافی غربال مولکولی سفاکریل S200 خالص گردید. غلظت نمونه پروتئین توسط روش برادفورد بررسی گردید و فرآیند خالص سازی آنزیم با کمک ژل الکتروفورز SDS-PAGE بررسی شد. غلظت پروتئین فرکشن های خروجی از ستون کروماتوگرافی اندازه گیری شد. سنجش فعالیت آنزیمی نمونه های خالص شده با استفاده از سوبسترای لینولئیک اسید در طول موج 660 نانومتر انجام شد. وزن مولکولی آنزیم تخلیص شده بر اساس SDS-PAGE حدود 130 کیلو دالتون تخمین زده شد. بر اساس آنالیز فعالیت آنزیم در محدوده 9-3 pH، آنزیم دارای حداکثر فعالیت در pH=7 است. فعالیت آنزیم در محدوده pH های اسیدی کاهش شدیدی یافته است. اثر آهن بر روی فعالیت آنزیم نیز بررسی گردید. با توجه به کاهش جذب نمونه آنزیمی در طول موج 660 نانومتر، کاتیون آهن (+Fe(2) سبب افزایش فعالیت آنزیم شد، در حالیکه فعالیت آنزیم لیپواکسیژناز در حضور کاتیون سه ظرفیتی آهن (+Fe(2) کاهش یافت.

کلیدواژه ها:

تخم کتان (Flaxseed (Linumusitatissimum ، آنزیم لیپواکسیژناز ، کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون ، سولفات آمونیوم ، الکتروفورز SDS-PAGE ، کاتیون آهن