آشنایی با تکنیک( Fluorcent In Stu Hybridization)FISH

هدف : (Fluorcent In Stu Hybridization)FISH یک تکنیک سیتوژنتیک است که برای تشخیص و تعین محل نمودن حضور یا عدم حضور یک توالی مشخص از DNA در کروموزوم مورد استفاده قرار می گیرد. در این تکنیک از پروب های فلورسنتی استفاده می شود که تنها به بخش هایی از کروموزوم که درجه بالایی از تشابه توالی را با آن ها دارند؛ متصل می شوند. استفاده از انواع خاصی از میکروسکوپ می تواند برای تشخیص این که پروب فلورسنت به کجای کروموزوم متصل شده است به کار رود. از این تکنیک می توان در موارد مختلف از جمله تشخیص عوامل پاتوژن برای آبزیان استفاده کرد. مواد و روش کار: فرایند آماده سازی و هیبریداسیون: ابتدا یک پروب ساخته شده و نشانه گذاری می شود. پروب باید به اندازه کافی بزرگ باشد تا بتواند به طور اختصاصی با DNA هدف خود هیبرید شود. سپس کروموزوم در مرحله اینترفاز یا متافاز فیکس شده و به سوبسترا که معمولا شیشه است می چسپند. توال های تکراری DNA باید با افزودن قطعات کوچک DNA به نمونه بلوکه شوند. سپس پروب برای DNA کروموزوم مورد استفاده قرار گرفته و به مدت 12 ساعت انکوباته می شوند. مراحل متوالی شستشو پروب های هیبرید نشده را از بین می برد و سپس نتایج با میکروسکوپ مخصوص مشاهده می شوند. نتایج و بحث : FISH کاربرد های زیادی در بیولوژی مولکولی و علوم پزشکی دارد که عبارتند از نقشه گذاری ژن، تشخیص بدشکلی های کروموزومی و مطالعه ساختار و عملکرد سلولی . کروموزوم ها در هسته محافظت شده سلولی با استفاده از این تکنیک می توانند رنگ آمیزی شوند. در تحقیقات کلینیکی FISH می تواند در تشخیص ناهنجاری های پیش زادی، حامل های بیماری های ارثی ، تشخیص بیماری های عفونی ، ویروسی ، باکتریایی ، تشخیص سیتوژنتیک تومورها و نیز تشخیص بیان ژن های ناهنجار در انسان و حیوانات مورد استفاده قرار گیرد. این تکنیک همچنین در مطالعات تکاملی برای تشخیص گونه های شبیه به هم نیز به کار می رود.پروب های باکتریایی FISH اغلب پرایمر های ژن 16s rRNAهستند.یکی از گسترده ترین کاربرد های این تکنیک تشخیص انواع خاصی از میکرو ارگانیسم ها در یک بیوفیلم است زیرا به عنوان مثال تشخیص گونه های مختلف باکتری در یک بیوفیلم کار دشواری است اما با طراحی پروب های مختص باکتری مورد نظر می توان به وجود آن پی برده وکار تشخیص در موارد مشکوک به وجود گونه های مشابه باکتری با سهولت انجام گیرد.

کلیدواژه ها:

Fluorcent In Stu Hybridization ، FISH