روشی تغییر یافته در جداسازی انگل لیشمانیا در مدل های آزمایشگاهی

هدف: انگل های جنس لیشمانیا مولد طیفی از بیماری های جلدی، احشایی و مخاطی در نقاط مختلف دنیا بوده و در کشور ما نیز در برخی نواحی به صورت آندمیک حضور دارند. در روند تحقیقات بر روی این انگل استفاده از مدل های آزمایشگاهی که در مورد لیشمانیا ماژور موش سفید آزمایشگاهی یا سوری می باشد و نحوه جداسازی از آن ها حائز اهمیت می باشد. در روش های مرسوم در مورد لیشمانیا ماژور پس از ایجاد ضایعه در حیوان از ترشحات اطراف زخم نمونه برداری و به محیط NNN انتقال می دهند که پس از مدتی پروماستیگوت ها قابل مشاهده خواهند بود. مواد و روش کار: پروماستیگوت های بیماری زا به قاعده دم موش های Balb/c تزریق و پس از ایجاد ضایعه نمونه گیری صورت گرفت : 1-ابتدا موش ها کشته ودر سطح مناسب ودر مجاورت شعله قرار داده شدند. 2-با استفاده از الکل و تیغ مخصوص اصلاح موهای اطراف ضایعه کاملا جدا گردید. 3-با استفاده از تیغ بیستوری (جراحی ) سطح ضایعه کاملا بر داشته شد . 4-حال از بافت زیرین ضایعه در شرایط استریل یک قطعه بریده و به پلیت بلاد آگار معمولی که حاوی FBS%10- 1640-RPMI به صورت شناور در آن بود انتقال داده شد . 5-پلیت ها به انکوباتور26 درجه منتقل گردید. نتایج و بحث : بعد 24 ساعت در زیر لامینار از محیط شناورپلیت نمونه برداری و به فلاسک های کشت انتقال داده و با میکروسکوپ از نظر حضور انگل بررسی شد. با تکرار این روش مشاهده گردید که در 95% موارد جداسازی موفق بود. در اینجا نکاتی حائز اهمیت بود: 1-در اینجا از پلیت های بلاد آگار با خون گوسفندی استفاده گردید که تهیه آن در هر آزمایشگاهی مقدور و محدودیت های تهیه محیط NNN را ندارد. 2-در این جا در هیچ مرحله از آنتی بیوتیک استفاده نگردید چراکه بافت های زیرین ضایعه چون در داخل بدن حیوان قرار دارند؛ استریل بوده و این قطعات بافتی به خصوص در نواحی زیرین حاشیه ای ضایعه در عین استریلی حاوی میلیون ها آماستیگوت می باشند و هنگامی که در داخل محیط قرار داده می شوند هم چنان از آن ها اشکال پروماستیگوت آزاد می شوند. 3-در این روش با توجه به بزرگی پلیت و حجم زیاد محیط رویی در وهله اول قادر به جداسازی حجم بیشتری از انگل خواهیم بود که خود دارای اهمیت می باشد . 4-تنها نکته خاص در اینجا توانایی و مهارت فرد در انجام پروسه به صورت استریل می باشد که با لحاظ نمودن کلیه این نکات روشی موثر در جداسازی انگل خواهد بود.

کلیدواژه ها:

پروماستیگوت لیشمانیا ماژور ، موش Balb/c ، جداسازی از ضایعه