مرجان بحرآبادی - دانشجوی کارشناسی ارشد دانشگاه پیام نور کرج
محمدعلی ابراهیمی - دانشیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشگاه پیام نور کرج
فرهاد شکوهی فر - استادیار پژوهشکده علوم گیاهی دانشگاه فردوسی مشهد

بیان موقت بر پایه اگروباکتریوم به دلیل سادگی و سرعت بالا در مطالعات آنالیز عملکرد مورد توجه قرار گرفته است. موفقیت این روش به چگونگی برهمکنش سویه باکتری و رقم گیاه بستگی دارد. در این مطالعه چهار ژنوتیپ توتون به عنوان میزبان های بیان موقت در پاسخ به سویهGV3101اگروباکتریوم مورد مقایسه قرار گرفت. ناقلpGCGiحاوی ژن گزارشگر بتاگلوکرونیداز اینتروندار تحت کنترل پروموترCaMV35Sجهت بررسی بیان یوکاریوتی و ناقلpBI121بعنوان کنترل بیان پروکاریوتی به کار گرفته شد. جهت بیان موقت ژن گزارشگر از روش تزریق سلول های اگروباکتریوم به بافت برگ توتون یا اگرواینجکشن برگ استفاده شد. دیسک های برگی از منطقه نفوذ باکتری، 48 ساعت پس از تزریق جهت سنجش هیستوشیمیائی فعالیت آنزیم بتاگلوکرونیداز جداسازی شد. نتایج نشان داد سویهGV3101در میان ژنوتیپ های مورد بررسی، ژن بتاگلوکرونیداز اینتروندار را در دو گیاه Nicotiana tabacum var. Samsun و Nicotiana benthamiana بیان می نماید. بر اساس این نتایج دو ژنوتیپ مناسب جهت انجام مطالعات بیان موقت با استفاده از سویهGV3101انتخاب شد.

بیان موقت بر پایه اگروباکتریوم، ژن گزارشگر بتاگلوکرونیداز ، اینترون، اگرواینجکشن