لیلا پورهنگ - دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی
مقصود پژوهنده - عضو هیئت علمی گروه بیوتکنولوژی
اکبر شیرزاد - عضو هیئت علمی گروه گیاهپزشکی
محسن درزی رامندی - دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، کیلومتر ۳۵ جاده تبریز - مراغه

تشخیص ویروسها با استفاده از آنتیبادیهای اختصاصی اهمیت ویژه ای برای کنترل بیماریهای گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب زمینی دارد. یکی از مهم ترین ویروسهای سیب زمینی (PVX) Potato X Potexvirus با گسترده جهانی میباشد. در این تحقیق به منظور تولید آنتیبادی اختصاصی PVX ژن (CP) Coat protein آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش RT - PCRبا استفاده از آغازگرهای اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر CP انجام گرفت. الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول 714BP را تایید کرد. ژن CP و پلاسمید pGEX2TK توسط آنزیمهای BamHI و ecoRI برش داده شدند و پس از خالص سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pGEX2TK-CP به توان PVX با الکتروپوراسیون به باکتری E.coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتریهای حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک PCR و استخراج پلاسمید از آنها، توالییابی درست بودن کلون ایجاد شده را تایید کرد. در ادامه پلاسمید نوترکیب به سویه RRosetta باکتری E.coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن IPTG در محیط کشت باکتری تولید پروتئین CP از روی پلاسمید انجام و پروتئین های باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین ، بیان شدن CP را نشان داد. این پروتئین پس از خالص سازی جهت تولید آنتیبادی اختصاصی PVX مورد استفاده قرار میگیرد.

Coat protein, PVX پروتئین نوترکیب ، همسانه سازی، آنتی ژن