جداسازی و شناسایی عوامل باکتریایی بیماری شانکر درختان میوه هسته دار به روش بیوشیمیایی و مارکر های مولکولی در استان کهگیلویه و بویر احمد

شانکر درختان میوه هسته دار از مهم ترین بیماری درختان میوه هسته دار است که به آن بلاست شکوفه، بلاست غنچه و مرگ سر شاخه نیز گفته می شود و از نظر خسارت اقتصادی یکی از مهمترین بیماری های درختان میوه هسته دار در دنیا به شمار می رود. هدف از اجرای این پروژه، شناسایی عوامل باکتریایی در بروز این بیماری و مقایسه ایزوله های جدا شده با همدیگر بود. برای اجرای این پروژه، نمونه هایی از برگ، شاخه و میوه آلوده به شانکر از درختان هلو، زرد الو، گیلاس و بادام از مناطق مختلف سرد سیری استان (کاکان، دنا، گنجگون و مارگون) طی سال ‮‭1392‬ و ‮‭1393‬ جمع آوری و پس از ثبت مشخصات، به آزمایشگاه منتقل گردید. عوامل جدا شده خالص سازی و آزمون های فنوتیپی از جمله تست های کلیدی لوان، اکسیداز، آرژنین دی-هیدرولاز، لهانیدن ورقه های سیب زمینی و فوق حساسیت روی آنها انجام گرفت. تمامی جدایه ها در محیط کینگ ب ایجاد رنگیزه فلورسنت نموده و گرم منفی و هوازی بودند، در آزمون آرژنین دیصهیدرولاز، تولید لوان متغیر بودند و جدایه های فاقد توان لهانیدن سیب زمینی، در آرژنین دی هیدرولاز نیز منفی بودند. در آزمون اکسیداز نیز جدایه هایی که فقط فوق حساسیت در توتون داشتند، اکسیداز منفی بودند و جدایه های با توانایی پوسیدگی نرم در آزمون اکسیداز متغیر عمل کردند. برای تعیین توالی محصولات‭PCR‬، پنج نمونه از جدایه-های مناطق مختلف که در محدوده ‮‭1200‬ جفت بازی با آغازگرهای اختصاصی تکثیر شدند، جهت مقایسه جایگاه فیلوژنتیکی به شرکت ماکروژن فرستاده شد و تعیین توالی با روش اتوماتیک انجام گرفت. بر اساس نتایج فنوتیپی و مولکولی بدست آمده‮‭32‬، جدایه از باکتری ‭Pseudomonas ‬به عنوان عامل این بیماری شناسایی شدند که شامل باکتری های ‭Pseudomonas. syringa pv. syringae ‬، ‭Pseudomonas viridifalava ‬و ‭Pseudomonas sp ‬بودند که بیشترین فراوانی مربوط به گونه ‭viridiflava Pseudomonas ‬است. جدایه های مورد بررسی از نظر مکان جمع آوری و نوع اندام مورد جداسازی تفاوت چندانی باهم نداشتند. واژه های کلیدی: شانکر باکتریایی، درختان میوه هسته دار، باکتری ‭Pseudomonas ‬،آزمون های فنوتیپی و مولکولی