Fusion of Cholera toxin B subunit (ctxB) with Shigella dysenteriae type I toxin B subunit (stxB), Cloning and Expression that in E. coli

زمینه و هدف: یکی از مهم ترین فاکتورهای بیماری زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ ۱، انتروتوکسین شیگلا یا STxمی باشد، که از یک زیر واحد سمی آنزیماتیک به نام STxA و یک زیر واحد پنتامریک متصل شونده به رسپتور به نام زیر واحد B یا STxB تشکیل شده است. زیر واحد STxB مسئول اتصال زیر واحد سمی به گیرنده سطح سلولی Gb۳ بوده و در نهایت باعث ورود سم به درون سلول و اثرات آن می شود. زیر واحد B سم کلرا (CTB) به عنوان ادجوانت مخاطی قوی برای واکسیناسیون شناخته شده و همجوشی ژنتیکی آن با هترو آنتی ژن هایی مثل stxB باعث تقویت ایمنی همورال و مخاطی و پاسخ ایمنی علیه آن آنتی ژن می گردد. مواد و روش ها: در این مطالعه ژن های ctB و stxB پس از طراحی پرایمر به وسیله PCR تکثیر و در وکتور pGEMهمسانه سازی شدند. ژن stxB به همراه لینکر غیرفورینی به روش برش آنزیمی با ژن ctB در وکتور pGEM الحاق شدند و در نهایت قطعه کایمریکctB-stxB در وکتور بیانی pET۲۸a(+) زیر همسانه سازی گردید. پروتئین کایمر تحت القای IPTG بهینه سازی و به وسیله تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: قطعه کایمریک ctB-stxBدر وکتور بیانی pET۲۸a(+) به وسیله توالی یابی، PCR و آنالیز آنزیمی تایید گردید. همچنین پروتئین تولیدی به وسیله SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب تولیدی بعد از بررسی ایمنی زایی می تواند به عنوان کاندیدی برای واکسن مخاطی موثر و نوین علیه باکتری شیگلا دیسانتری تیپ ۱ در نظر گرفته شود.

کلیدواژه ها:

Adjuvant ، CTB ، Nonfurin linker ، StxB ، Shigella Dysenteriae type I ، شیگلا دیسانتری تیپ ۱ ، STxB ، CTB ، ادجوانت ، لینکر غیر فورینی.