ارزیابی کمی و بهینه سازی تشخیص DNA آسپرژیلوس فومیگاتوس در نمونه خون با استفاده از تکنیک Real time PCR

سابقه و هدف: آسپرژیلوزیس مهاجم عفونت فرصت طلب جدی ناشی از گونه های مختلف قارچ آسپرژیلوس است که اغلب در افراد دارای نقص سیستم ایمنی رخ می دهد. اساسا، تشخیص سریع و زودرس آن، از پیشرفت این عفونت قارچی جلوگیری بعمل می آورد. هدف از این مطالعه تعیین کمی و بهینه سازی DNA آسپرژیلوس فومیگاتوس در خون با استفاده از تکنیک Real time PCR بود.مواد و روش ها: پنج میلی لیتر خون داوطلب سالم را با رقت های مختلفی از کونیدی های آسپرژیلوس فومیگاتوس (۱۰۶ تا ۱۰۱) آلوده شد. استخراج DNA از خون با استفاده از گلوله شیشه ای و کیت QIAmp DNA Blood Mini Kit انجام شد. پرایمر و پروب های هیبریدیزاسیون برای تکثیر سکانس های اختصاصی گونه متعلق به ژن۱۸S rRNA آسپرژیلوس فومیگاتوس طراحی و با استفاده از روشReal time و تکنیک FRET مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: تمامی واکنش های PCR با DNA دیگر گونه های قارچی منفی بودند که نشان دهنده اختصاصیت ۱۰۰ درصد این روش بود. آنالیز دمای ذوب آسپرژیلوس فومیگاتوس تنها در یک نقطه حداکثر سیگنال دمایی را با پروب در دمای ۶۹.۱۶ C نشان دادکه به تشخیص آسپرژیلوس فومیگاتوس کمک می کند. حداقل مقدار DNA (۱۰۰fg) CFU ۱۱۰ معادل ۱۰ کونیدی یا سلول در هر واکنش PCR مشخص گردید که نشان دهنده حساسیت بالای این روش می باشد.استنتاج: روش Real time PCR با بکارگیری پروب های هیبریدیزاسیون دارای اختصاصیت و حساسیت بالا برای اندازه گیری بار قارچی جهت تشخیص زودرس و مانیتورینگ درمان می باشد.

کلیدواژه ها:

Ïnvasive aspergillosis ، quantitative PÇR ، diagnosis ، آسپرژیلوزیس مهاجم ، Quantitative PCR ، تشخیص