بیان و خالص سازی پروتئین همراه با همانند سازی (Rep) جدایه استرالیایی ویروس پیچیدگی برگ گوجه فرنگی (Tomato leaf curl virus- Australia) در باکتری Escherichia coli

جدایه ی استرالیایی ویروس پیچیدگی برگ گوجه فرنگی (Tomato leaf curl virus-Australia (TLCV-Au یکی از اعضای تک بخشی جنس Begomovirus (تیره ی Geminiviridae) است. پروتئین همراه با همانند سازی جمینی ویروسها (رپ، Rep) تنها پروتئین مورد نیاز برای همانند سازی دیانای ویروس به حساب می آید. برای تهیه ی آموده ی خالص رپ، از یک سازه ی حاوی چارچوب خوانش C1 (چارچوب کد کننده ی رپ) که با استفاده از دو آنزیم HindIII و BamHI در ناقل بیان pQE30 تعبیه شده بود، استفاده گردید. تراریخت کردن سویه ی M15 باکتری Escherichia coli با استفاده از پلاسمید نوترکیب pQE30-C1 صورت پذیرفت، سپس بیان قطعه مورد نیاز به صورت یک پروتئین ترکیبی همراه با هیستدین در باکتری ا نجام شد. نتایج حاصل از الکتروفورز در ژل پلی آکریل آمید حاوی SDS پروتئینی با وزن مولکولی 44-42 کیلو دالتون را مشخص نمود و همچنین خالص سازی پروتئین مذکوردر شرایط غیر واسرشتی با استفاده از رزین Ni2+-NTA باند پروتئینی با همین اندازه را نشان داد. متوسط غلظت آموده های پروتئین خالص شده با استفاده از روش برادفورد در حدود 50 μg/ml تخمین زده شد. بیان پروتئینهای مخلتف جمینی ویروسها از جمله رپ میتواند در تعیین عملکرد پروتئینها و مطالعات سرولوژیکی مورد استفاده قرار گیرد.