طراحی ژن، همسانه سازی و بیان پپتید نوترکیب دارویی تری پاراتید در باکتری اشریشیاکولی

سال انتشار: 1393
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 478

فایل این مقاله در 5 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

CBGCONF02_433

تاریخ نمایه سازی: 9 فروردین 1395

چکیده مقاله:

هورمون تری پاراتید (rhPTH) شکل نوترکیب هورمون 115 اسید آمینه ای پارتیروئید است که از غدد پاراتیروئید ترشح می شود. نقش فیزیولوژیکی این هورمون فراهم کردن کلسیم سرم و بازسازی استخوان ها است. تحقیقات نشان دادهاند که تریپاراتید سبب افزایش جذب کلسیم در استخوان می شود. بنابراین این شکل نوترکیب از سال 2002 برای درمان بیماران مبتلا به استئوپورز مورد استفاده قرار می گیرد. در بیماری استئوپورز توده استخوانی فرد مبتلا کاهش یافته و بیمار مستعد شکستگی استخوانها است. تزریق زیر جلدی داروی تری پاراتید در این افراد توده استخوانی را در هر سال 10% افزایش میدهد . هدف از انجام این پژوهش، بیان بالای تریپاراتید در اشریشیاکولی و اتخاذ راهکارهایی برای بهینه سازی تخلیص در مراحل بعدی است. برای رسیدن به این منظور، ژن حاوی اسید آمینه1 تا ۳۴پایانه ی آمینی هورمون پاراتیروئید که بخش عملگر آن است با بخشی از ژن آنزیم β- گالاکتوزیداز باکتریایی(متشکل از 52 اسید آمینه) فیوز شده و در میان توالی دو آنزیم محدودگر NcoI-BamH1 قرار گرفت . یک مکان شناسایی شونده توسط آنزیم انتروپپتیداز در انتهای بخش فیوز شده قرار داده شد . کاست طراحی شده تحت کنترل پروموتور T7 و در وکتور pET-28a کلون شد . پس از تایید توالی ژن همسانه سازی شده، پلاسمید حاوی ژن طراحی شده، به باکتری E. coli BL21 (DE3) منتقل گردید. بیان ژن مذکور پس از القاء با (IPTG(0.2 mM به میزان مناسب مشاهده شد. جهت تایید بیان کاست طراحی شده، از وسترن بلات استفاده شد . با مشاهده بیان مناسب تری پاراتید، جهت القا بدون IPTG و تخلیص با بازدهی بالا اقدام خواهد شد .

نویسندگان

سپیده ساغری دوز

دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی میکروبی، سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران، تهران

ناهید بختیاری

عضو هیئت علمی پژوهشکده زیست فناوری ، سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران،تهران