ساخت وکتور بیانی نوترکیب حاوی 3 ژن تولید کننده ی پلاستیک های طبیعی

بیوپلاستیک ها، پلی استرهایی هستند که بوسیله تعدادی از میکروارگانیسم ها که تحت شرایط متفاوت محیطی و غذایی رشد کرده اندف تولدی می گردند. یکی از عمده ترین انواع بیوپلاستیک ها، پلی هیدروکسی بوتیرات (PHB)، پلی هیدروکسی آلکانوآت (PHA) و مشتقات آنها می باشد. این پلیمرها، پلاستیک های قابل تجزیه ی زیستی می باشند که می توانند جایگزین خوبی برای پلاستیک های پتروشیمیایی رایج باشند. Ralstonia eutropha H16 یکی از تولید کنندگان بالقوه ی PHB می باشد. اگر چه توانایی تولید و انباشته کردن این پلیمر در R. eutropha به اثبات رسیده است، ولی هزینه ی تولید بالای آن، بکارگیری PHA بعنوان بیوپلاستیک محدود کرده است. از اینرو تلاش های زیادی برای کاهش هزینه ی تولید از طریق ا یجاد باکتری های نوترکیب و استفاده ی منبع کربن ارزان انجام شده است. PHB طی 3 مرحله ی آنزیمی توسط یک آنزیم β- کتوتیولاز (phbA)، یک استواستیل CoA ردوکتاز (phbB) و یک PHA پلیمراز (phbC) سنتز می گردد. در این مطالعه پس از استخراج ژنوم این باکتری، پرایمرهای ویژه ای برای تکثیر کل اپرون ژنهای کد کننده ی آنزیمهای تولید کننده PHB شامل ژنهای phbCAB طراحی شد که درانتهای 5’ خود حاوی جایگاه برش آنزیمی هستند که پس از تخلیص، با آنزیم های ویژه برش خورده، استخراج گردیده و به وکتور بیانی pET 28a کلون گردید. انجام این مرحله بی شک یکی از مهمترین مراحل در مسیر تولید پلاستیک های طبیعی با استفاده از روش های بیوتکنولوژی می باشد.

کلیدواژه ها:

بیوپلاستیک ، پلی هیدروکسی بوتیرات (pET28a ، Ralstonia eutropha H16 ، (PHB ، ژنهای phbCAB