کلونینگ و بیان آنتیژن پروتئینی Esat-6 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در باکتری اشرشیا کلی

سل یکی از مشکلات عمده بهداشتی است. پروتئینEsat-6یکی از مهمترین پروتئینهای ایمنی زا در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس است که بوسیله سلولهای Tشناخته میشود و باعث القای پاسخهای ایمنی سلولی قوی میشود. هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان پروتئینEsat-6مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در اشرشیا کلی بود. مواد و روش هاDNAکد کنندهEsat-6پس از بررسی از بانک ژن اخذ شد و در وکتورpGHسنتز گردید. توسط پرایمرهای یونیورسال پلاسمید تکثیر و پس از برش با آنزیمهای محدودگر در ناقل بیانی پروکاریوتیpQE30کلون شد و به باکتریE. coliسویهBl21انتقال داده شد و تولید پروتئین با القا توسطIPTGو بهینه سازی شرایط صورت گرفت. یافته ها: پلاسمید نوترکیب به وسیلهPCRکلونی، هضم آنزیمی و توالییابیDNAمورد تائید قرار گرفت. پروتئینهای بیان شده به روشSDS-PAGEآنالیز و تولید پروتئینEsat-6با استفاده از آنتیبادی اختصاصی ضدHis tagبه روشWestern blotتأیید گردید. نتیجه گیری: پروتئین مورد نظر در باکتری کلون و بیان شد. با توجه به اینکه آنتی ژنEsat-اختصاصی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس بوده و در مراحل اولیه بیماری سل ترشح میشود میتوان از آن برای طراحی آنتی بادی ضدEsat-6و جهت تشخیص سل نهفته و فعال استفاده نمود

کلیدواژه ها:

کلونینگ ، بیان ، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ، Esat-6