کلونینگ و بیان ژنLmSTI1 انگل لیشمانیا ماژور درE.coli

انگلهای لیشمانیا ایجاد لیشمانیوز می کنند که طیف وسیعی از بیماریها از اختلالات پوستی تا عفونتهای سیستمیک کشنده را شامل میشود. مطالعات قبلی بیان آنتی ژنهای مختلف لیشمانیا را در سیستم های بیانی متفاوت با اهداف ساخت واکسن و برنامه های تشخیصی ، مورد بررسی قرار داده اند. در مطالعه حاضر، امکان بیان ژنLmSTI1 پروتئین اصلی القای شوک حرارتی 1 ) درE.coliمورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور ژن(MRHO/IR/75/ER ) LmSTI1 تخلیص شده و در وکتورpUC18شکری و همکارانکلون گردید. سپس با روشPCRبصورت قطعه ای با طولbp1641و جایگاه شناسایی آنزیمهای BamHI,NdeIتکثیر شد . قطعهء حاصل در سایت های مشابهی در وکتوربیانیpET-15bتحت کنترل پروموترT7در پایین دست بر چسبHisدر انتهای آمینی ، کلون گردید و در باکتریE.coli DH5αترانسفورم شد. کلونیهای نوترکیب در محیط حاوی آمپی سیلین غربال گردیدند و وکتور نوترکیبpET-15b.LmSTI1پس از تخلیص از کلنی های انتخابی، با استفاده از روشهای هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شدند. سازه ی نوترکیبpET-15b.LmSTI1 تایید شده برای بیان پروتئین در باکتریE.coli BL21(DE3 ترانسفورم شد. بیان ژن با افزودنM IPTG0,1 در فاز لگاریتمی رشد باکتریها به مدت 3 ساعت القاگردید. بیان پروتئین با استفاده از ژل % 12SDS-PAGEو وسترن بلاتینگ بررسی شد و بیان مناسب ژنLmSTI1 با اندازهء مورد انتظار ، وجود پروتئین نوترکیب را تائید کرد. پروتئین نوترکیبLmSTI1 می تواند در مطالعات آینده برای ساخت واکسن و یا اهداف تشخیصی مورد استفاده قرار بگیرد

کلیدواژه ها:

کلونینگ ، LmSTI1 ، بیان ، E.coli BL21