بررسی انتقال ژن فاکتور محرکه کلنی گرانولوسیت انسانی به کلروپلاست کاهو

تحقیق در زمینه خون سازی از قرن بیستم با استفاده از طیفی از ابزارهای متنوع شامل ابزارهای ‭in vivo ‬در حیوانات و سنجش های کلونوژنیک، تا تجزیه مولکولی به سرعت پیشرفت کرده است. تمام مراحل روند خون سازی تحت فاکتورهای اختصاصی می باشد. این فاکتورها تحت عنوان کلی سیتوکین ها یا فاکتورهای رشد خون ساز شناخته می شوند. سیتوکین های خون ساز تنظیم کننده های گلیکوپروتیینی هستند که بقا، تکثیر و تمایز سلول های پیش ساز خون را کنترل می کنند. بیش از ‮‭25‬ سیتوکین شناسایی شده اند که تعدادی از آنها از جمله ‭G-CSF ‬فعالیت خون سازی را نشان می دهند. طی این تحقیق ژن ‭G-CSF ‬جدا شده از سرم خون یک فرد سالم که درون ناقل کلونینگ ‭pBlueskriptsk ‬قرار گرفته، به درون باکتری ‭E. coli ‬منتقل گشته و تکثیر گردید؛ با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و آنزیم ‭pfu ‬پلیمراز، تکثیر و متعاقب آن این ژن و پلاسمید ‮‭39‬‭-pCL‬‮‭96‬ به وسیله آنزیم های برشی، یکسان بریده شده و سپس ژن مورد نظر در پلاسمید ‮‭39‬‭-pCL‬‮‭96‬ جایگیری گردید. بعد از تایید قرارگیری صحیح ژن ‭hG-CSF ‬در درون پلاسمید ‮‭39‬‭-pCL‬‮‭96‬ با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، در مرحله بعد پلاسمید حاوی ژن مربوطه به باکتری ‭E. coli ‬منتقل گشته و تکثیر از آن انجام گردید و سپس پلاسمید حاوی ژن ‭G-CSF ‬استخراج گشته و وجود ژن توسط آنزیم های برشی و ‭PCR ‬درون ناقل تایید گردید و از طریق تفنگ ژنی منتقل شدند. گیاهان باززا شده در محیط انتخابی چند بار واکشت گردیدند و بعد از این مرحله به محیط ریشه زایی منتقل و آزمون ‭PCR ‬برای آنها انجام گرفت. آنالیز ‭PCR ‬با پرایمرهای اختصاصی حضور ژن به طول ‭bp‬‮‭700‬ را تایید نمود و نهایتا نتایج وسترن 4 گیاه تراریخت نشان می دهد که 3 نمونه از گیاهان تراریخت ژن مورد نظر را بیان می کردند. واژه های کلیدی: فاکتور محرکه کلنی گرانولوسیتی‭. .hG-CSF ‬کاهو، داروی نوترکیب، گیاه تراریخت، ترانس پلاستومیک، کلروپلاست