جداسازی،کلونینگ و بررسی ویژگی های بیوانفورماتیکی ژن دلتا۱۵ دسچوراز از مخمر Pichia pastoris GS۱۱۵ جهت افزایش تولید اسید چرب آلفالینولنیک اسید در دانه های روغنی

اسیدآلفالینولنیک یکی از اجزای تشکیل دهنده اسیدهای چرب امگا۳ می باشد که برای حفظ سلامت بدن انسان ضروری بوده ولی در داخل بدن انسان ساخته نمی شوند. هدف از این پژوهش همسانه سازی ژن دلتا۱۵دسچوراز به منظور افزایش تولید اسیدآلفالینولنیک در گیاهان دانه روغنی می باشد. بدین منظور، پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از مخمر پیکیا پاستوریس سویه GS۱۱۵، این ژن توسط پرایمرهای اختصاصی حاوی توالی کوزاک تکثیر، و جهت توالی یابی در وکتورPTZ۵۷R/T همسانه سازی شد. قطعه نوترکیب پس از تایید توالی از وکتور TA جدا و به pBluescript KS(+) حاوی پروموتر ناپین الحاق شد. سپس سازه ژنی طراحی شده جهت انتقال به گیاه، در ناقل دوگانه pBI۱۲۱ همسانه سازی و به آگروباکتریوم تومیفاسینس سویه LBA۴۴۰۴، منتقل شد. خصوصیات بیوانفورماتیکی ژن مورد بررسی توسط ابزارهایی مانندTopPred TMHMM,، ProtParam وSOPMA بررسی گردید. نتایج واکنش PCR و تکثیر قطعه ای به طول bp۱۲۴۶ صحت همسانه سازی این ژن را تایید کرد. همچنین تکثیر قطعه ای به طول bp ۱۲۱۰ توسط پرایمرهای داخلی پروموتر ناپین و ژن دلتا ۱۵دسچوراز، و نیز ایجاد قطعه bp ۲۱۴۵ در هضم آنزیمی، تاییدی بر الحاق صحیح این ژن در امتداد پروموتر ناپین بود. نتایج توالی یابی نوکلئوتیدی نشان داد که توالی کد کننده این آنزیم مشتمل بر ۱۲۴۶ نوکلئوتید و کد کننده ۴۱۵ اسید آمینه می باشد. آنالیز توالی آمینواسیدی وجود دو دومین و ۵ هلیکس تراغشایی را تایید کرد. همچنین پیش بینی خواص پروتئینی، بررسی سیگنال پپتیدها و ساختار دوم، ثابت کرد که این آنزیم جزء آنزیم های پایدار و غشایی می باشد.

کلیدواژه ها:

ژن کلونینگ ، آلفالینولنیک اسید ، دلتا۱۵ دسچوراز ، پیکیا پاستوریس