طراحی روشی نوین بر پایه پپتید های تراوا کننده غشا جهت افزایش بازدهی انتقال DNA خارجی به باکتری اشرشیاکولی

سابقه و هدف: انتقال DNA خارجی با بازدهی بالا به داخل باکتری از مهمترین مراحل در زیست فناوری میکروبی می باشد. برای این منظور چند روش مرسوم است که در بین آن ها روش کلسیم کلراید سرد از جمله مهمترین و ارزان ترین روش ها جهت انتقال DNA به درون سلول های باکتریایی گرم منفی مانند Escherichia coli می باشد. به طور معمول بازدهی انتقال DNA در این روش۱۰۷- ۱۰۵ کلونی برای یک میکروگرم از DNA خارجی می باشد. با توجه به اهمیت فرایند انتقال DNA، تلاش های بسیاری به منظور بهینه سازی روش های مرسوم همچون کلرید کلسیم صورت گرفته است. در این مطالعه نشان دادیم با استفاده از یک پپتید کاتیونیک تراوا کننده غشاء (CM۱۱) و بر پایه روش استاندارد کلرید کلسیم، می توان DNA خارجی را با بازدهی بالاتری به درون باکتری E.coli انتقال داد. مواد و روش ها: سلول های باکتریایی توسط غلظت های متفاوت پپتید ( ۵/۰، ۱ ،۲ ،۳ و ۶ میکرو گرم در میلی لیتر) و به دو روش متفاوت و بر پایه مستعدسازی توسط کلرید کلسیم، تیمار شدند. سپس پلاسمیدهای pET-۲۸a(+), pGEX۴T-۱ وpUC۱۹ به عنوان مدل و به صورت جداگانه به درون باکتری مستعد شده منتقل گردیدند. یافته ها: نتایج نشان داد که بالاترین بازدهی انتقال پلاسمید برای باکتری های مستعد شده در حضور غلظت ۱ میکروگرم در میلی لیتر پپتید بدست می آید. در این غلظت افزایش انتقال برای پلاسمیدهای pET-۲۸a(+), pGEX۴T-۱ وpUC۱۹ به ترتیب ۴/۴، ۷/۴ و ۴ برابر نمونه کنترل بود.  نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که پپتید CM۱۱ به عنوان یک پپتید تراوا کننده غشاء سلول می تواند باعث افزایش کارامدی انتقال DNA به درون باکتری E. coli با استفاده از مستعدسازی به روش شیمیایی کلرید کلسیم گردد.

کلیدواژه ها:

CM۱۱ ، Escherichia Coli ، Peptide ، Transformation ، ترانسفورماسیون ، پپتید CM۱۱ ، پلاسمید ، اشرشیا کولی