جداسازی لپتوسپیراهای بیماری زا از خون بیماران و تشخیص و تایپینگ آنها به روش PCR-RFLP

زمینه و هدف : لپتوسپیروز یک بیماری مشترک انسان - حیوان شایع در سراسر جهان به ویژه در مناطق گرمسیری و نیمه گرمسیری از جمله در ناحیه جلگه ای استان گیلان است که توسط گونه های بیماری زای لپتوسپیراها به وجود می آید. تعیین هویت لپتوسپیراها با سروتایپینگ توسط روش MAT  پرهزینه، وقت گیر و پیچیده است و روش های ملکولی می توانند؛ جایگزین شوند. این مطالعه به منظور جداسازی لپتوسپیراهای بیماری زا از خون بیماران و تشخیص و تایپینگ آنها به روش PCR-RFLP در استان گیلان انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه توصیفی ، بیماران بستری شده در بخش های اورژانس، داخلی و عفونی بیمارستان رازی رشت که تشخیص بالینی لپتوسپیروز داشتند؛ از ابتدای اردیبهشت تا پایان مرداد ۱۳۸۷ بررسی شدند. کشت های مثبت با روش فنل-کلروفرم مورد استخراج DNA  قرار گرفتند. PCR با استفاده از دو جفت پرایمر G۱ و G۲ و B۶۴-I و B۶۴-II  انجام شد. محصول PCR حاصل از پرایمرهای G۱ و G۲ با آنزیم DdeI و محصول PCR حاصل از پرایمرهای  B۶۴-Iو B۶۴-II با آنزیم hinf I برش داده شدند و الکتروفورز گردیدند و الگوی باندی آنها با الگوهای مربوط به سویه های استاندارد مقایسه وتعیین هویت شد. یافته ها : ۶۵ مورد از مجموع ۱۰۷ نمونه کشت داده شده؛ مثبت گردیدند. ۵۶ نمونه با پرایمرهای G۱ و G۲ جواب دادند که به گونه های اینتروگانس و بورگ پترسنی متعلق بودند و ۹ مورد نیز با پرایمرهای  B۶۴-I و B۶۴-II  پاسخ دادند که همگی به گونه کیرشنری متعلق بودند. نتیجه گیری : این مطالعه نشان داد که اکثریت لپتوسپیراها در این منطقه از گونه های اینتروگانس و بورگ پترسنی می باشند. با توجه به مشکلات متعدد در سروتایپینگ لپتوسپیراها، روش PCR-RFLP برای تعیین هویت و مطالعه ساختارهای یک جمعیت داخل گونه ای مفید می باشد و استفاده مستقیم از آن برای نمونه های بالینی و تشخیص سریع و تعیین هویت ، کاربرد دارد.

کلیدواژه ها:

Leptospirosis ، Molecular diagnosis ، Molecular typing ، لپتوسپیرا ، تشخیص ملکولی ، تایپینگ ملکولی