کلونینگ و توالی یابی پلاسمید کد کننده پروتئین گرانولی متراکم ۱۴ سویه RH توکسوپلاسما گوندیی

سابقه و هدف: بیماری توکسوپلاسموز از بیماری های شایع در جهان می باشد که حدود یک سوم مردم دارای آنتی بادی بر علیه توکسوپلاسما هستند. این بیماری بیشتر به دلیل عوارض وخیم آن، در موارد مادرزادی و نیز بیماران نقص سیستم ایمنی اهمیت دارد. ژن کد کننده پروتئین ۱۴GRA می تواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت DNA (Deoxyribonucleic acid) واکسن و همچنین طراحی کیت تشخیصی مورد ارزیابی قرار گیرد. هدف از این بررسی، شناسایی و کلون کردن ژن کد کننده پروتئین ۱۴GRA سویه RH توکسوپلاسما گوندیی بود. مواد و روش ها: در مرحله اول پس از جداسازی تاکی زوئیت های توکسوپلاسما از مایع صفاقی موش آلوده، DNA آن استخراج شد و پس از انجام PCR (Polymerase chain reaction)، محصول تکثیر شده بر روی ژل الکتروفورز بررسی گردید. سپس ژن حاصل در وکتور pTG۱۹-T کلون گردید. جهت تایید از روش های Colony-PCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم های محدود کننده HindIII و EcoRI استفاده شد. در نهایت ژن ۱۴GRA کلون شده در وکتور pTG۱۹-T مورد تعیین توالی قرار گرفت. یافته ها: بررسی واکنش PCR بر روی ژل الکتروفورز و همچنین تعیین توالی ژن کد کننده پروتئین ۱۴GRA نشان داد که این ژن ۱۲۲۷ جفت بازی با ژن ۱۴GRA سویه RH ثبت شده در ژن بانک تشابه کامل داشت. علاوه بر این، با استفاده از روش های هضم آنزیمی و Colony PCR کلون شدن، ژن ۱۴GRA در پلاسمید pTG۱۹-T مورد تایید قرار گرفت. استنتاج: ژن ۱۴GRA به طور موفقیت آمیزی در پلاسمید pTG۱۹-T کلون شد و این پلاسمید می تواند برای مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن DNA و طراحی کیت تشخیصی مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

Toxoplasma gondii ، Dense granule antigen ۱۴ ، Cloning‎ ، توکسوپلاسما گوندیی ، ۱۴GRA ، کلونینگ