بهینه سازی توالی ژن رنین گاوی و تهیه سازه ژنی مناسب برای تولید کیموزین در مخمر Pichia pastoris
سال انتشار: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 75
فایل این مقاله در 14 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_FSCT-15-81_033
تاریخ نمایه سازی: 3 آذر 1402
چکیده مقاله:
کیموزین حیوانی به عنوان موثرترین آنزیم برای تولید پنیر مطرح است که این امر به دلیل کیفیت بسیار مناسب بافت و عطر و طعم پنیر تولید شده می باشد. با توجه به تقاضای روز افزون نسبت به این آنزیم نیاز است در کنار سایر منابع گیاهی و میکروبی از منابع نوترکیب نیز برای تولید این آنزیم استفاده گردد. در این پژوهش به منظور تولید نوترکیب کیموزین، و نیز بهبود بیان ژن کیموزین گاوی در مخمر، ابتدا توالی ژن کیموزین بر اساس کاربرد کدونی (Codon usage) مخمر پیچیا پاستوریس بهینه سازی و سنتز گردید. پس از بهینه سازی توالی نوکلئوتیدی، شاخص انطباق کدونی (CAI) از ۵۹/۰ به ۷۲/۰ افزایش پیدا کرد در حالی که، توالی ژنی ۸۳% با توالی بهینه شده مطابقت داشت. تعداد کدون های نادر با فراوانی کم تر از ۱۰% قبل از بهینه سازی ۴۱ عدد بود که پس از بهینه سازی هیچ کدونی با فراوانی کم تر از ۱۰% یافت نشد. به منظور انتقال ژن کیموزین A به وکتور بیانی pPIC۹ مخمری، ژن سنتز شده کیموزین با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و در وکتور PTG-۱۹ همسانه سازی گردید. کلونیهای نوترکیب از طریق روش غربالگری کلونی های سفید-آبی گزینش شدند. ژن کیموزین با استفاده از آنزیم های Not I و EcoR I از وکتور PTG۱۹-chymA برش داده شده و در وکتور pPIC۹ برش یافته با همان آنزیم ها همسانه گردید. کلونی های نوترکیب pPIC۹-chymA با استفاده از تکنیک کلونی PCR شناسایی و انتخاب شدند. ماهیت نوترکیبی و درج صحیح ژن کیموزین در وکتور بیانی مخمری pPIC۹ از طریق استخراج پلاسمید و برش با آنزیم برشی BamH I مورد تایید قرار گرفت.
کلیدواژه ها:
Recombinant chymosin ، Gene cloning ، Milk- clotting enzymes ، کیموزین نوترکیب ، همسانه سازی ژن ، آنزیم لخته کننده شیر
نویسندگان
Soheila Mohebzadeh
Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture and Natural Resources, University of Mohaghegh Ardabili, Ardabil, Iran
Rasool Asghari
Department of Agronomy and Plant Breeding, University of Mohaghegh Ardabili, Ardabil, Iran.
Bahram Fathi Achachlouei
Department of Food Science and Technology, Faculty of Agriculture and Natural Resources, University of Mohaghegh Ardabili, Ardabil, Iran.
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :