جداسازی و ژنوتایپینگ سویه های گاوی مایکوباکتریوم آویوم تحت گونه پاراتوبرکولوزیس از گله های گاو آلوده استان خراسان رضوی با استفاده از ‭Sequencing ‬و ‭RFLP-IS900‬

سالیان متمادی است که بیماری یون در نشخوارکنند گان ایران وجود دارد و خسارات جبران ناپذیری به صنعت دامپروری و تولیدات دامی کشور ما وارد می سازد. محققان سراسر جهان هشدار داداند که چنانچه اقدامات ضروری برای کنترل این بیماری صورت نگیرد، یکی از زیان بارترین خسارات مالی به اقتصاد هر کشوری که این بیماری در آن وجود دارد وارد خواهد شد. با توجه به علایم بالینی مشابه و جدا سازی و تشخیص مولکولی این باکتری در بسیاری از مبتلایان بیماری کرون در انسان، حدس زده می شود مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس در ایجاد بیماری کرون انسان نقش داشته باشد، لذا دانشمندان این باکتری را به عنوان یک تهدید بالقوه و مهم برای سلامت بهداشت عمومی در نظر می گیرند. در مقایسه با سایر روش ها منابع معتبرکشت مدفوع را به عنوان بهترین روش در تشخیص این باکتری در دام مبتلا معرفی می نمایند، لذا در این مطالعه علاوه بر تثبیت کردن و اجرای روش های کشت و شناسایی مولکولی عامل یون، باکتری های جدا شده جهت ژنوتایپینگ محفوظ نگهداشته شدند. در این مطالعه نمونه ها مدفوع، کود و شیر روی چهار محیط هرالد حاوی و فاقد مایکوباکتین کشت داده شدند. تمامی باکتری جدا شده با توجه به مورفولوژی پرگنه، رنگ آمیزی اسید فاست، و آزمایش ‭Nested PCR- IS‬‮‭900‬ مورد شناسایی قرار گرفتند. موارد مثبت و منفی در هرگروه با گروه های دیگر از نظر شهودی و آماری مورد ارزیابی قرار گرفتند. در این مطالعه تعداد ‮‭505‬ نمونه شامل ‮‭379‬ نمونه مدفوع، ‮‭126‬ نمونه کود و ‮‭148‬ نمونه شیر از ‮‭137‬ دامداری و مرکز جمع آوری شیر ‮‭11‬ شهرستان خراسان رضوی جمع آوری شد. در پایان ‮‭29‬ دامداری و ‮‭50‬ نمونه آلوده تشخیص داده شدند. در مرحله بعدی بعد از تجدید کشت و تکثیر باکتری های جدا شده ژنوتایپینگ آنها صورت گرفت. انواعی از تکنیک های ژنوتایپینگ برای تایپینگ مایکوباکتریوم پاراتوبرکولوزیس مورد استفاده قرار گرفته است، اما ‭RFLP ‬، تکنیکی است که در سطح بین المللی بیشترین مورد استفاده را برای انگشت نگاری ژنومی مایکوباکتریوم ها از جمله مایکوباکتریوم ها پاراتوبرکولوزیس بدنبال داشته است. از آنجا که تعداد ‮‭15‬ تا ‮‭20‬ کپی از سکانس اختصاصی ‭IS‬‮‭900‬ در ژنوم مایکوباکتریوم ها پاراتوبرکولوزیس وجود دارد، لذا این سکانس مارکر ژنتیکی مناسبی برای تشخیص و تشکیل پلی مورفیسم و تحقیقات اپیدمیولوژی مولکولی پاراتوبرکولوزیس می باشد. در مطالعه حاضر، الگوهای ‭RFLP-IS‬‮‭900‬ ناشی از کاربرد دو آنزیم محدود کننده ‭BstEII ‬و ‭PstI ‬در مقایسه با الگوهای مرجع که در دسترس بودند، مورد مقایسه قرار گرفتند. همانطور که انتظار می رفت، تمام سویهصهای جدا شده از گاو(شیر، مدفوع و یا کود) متعلق به تیپ ‭C (‬تیپ ‭II ) ‬بود. بر اساس الگو های ‭RFLP-IS‬‮‭900‬ حاصل از آنزیم ‭BstEII ‬، تیپ غالب C1 بود. تیپ C1 ، تیپ غالب جدا شده از گاو در اکثر کشور های اروپایی است و همچنین تیپ جدا شده از مبتلایان به بیماری کرون در انسان می باشد. اما در رابطه با الگو های حاصل از آنزیم دوم یعنی ‭PstI ‬تیپ ‭B ‬مورد شناسایی قرار گرفت، که بهتر است تلفیقی از دو تیپ یعنی ‭B-C‬1 را به عنوان تیپ غالب معرفی نماییم.