Cloning and Expression of Leptospira LipL۳۲ Antigen as a Candidate for Rapid Diagnosis

زمینه و هدف: یکی از مشکلات اصلی در بیماری لپتوسپیروزیس، دشواری تشخیص آن است که باعث شده این بیماری به عنوان یک چالش در سلامت انسان و دام مطرح باشد. با توجه به مشکلات موجود در آزمون آگلوتیناسیون میکروسکوپی (MAT) که روش معمول در تشخیص این عفونت است، تلاش های فراونی در جهت طراحی و اجرای روش های دقیق و سریع تشخیصی انجام شده است. با توجه به این که پروتئین غشای خارجیLipL۳۲ می تواند به عنوان کاندید مناسبی برای مصارف تشخیصی محسوب شوند، در این مطالعه قصد بر این است که این آنتی ژن را کلون و بیان نماییم. مواد و روش ها: ابتدا ژن LipL۳۲ بوسیله پرایمرهای اختصاصی و روش PCR تکثیر گردید و سپس در داخل وکتور بیانی pQE۳۰ کلون گردید و با استفاده از آزمون های کنترلی جهت قرار گیری قطعه مربوطه مورد تایید قرار گرفت. برای بیان پروتئین مورد نظر، پلاسمید نوترکیب ایجاد شده در درون میزبان مناسب (E.coli M۱۵)، وارد و سپس بیان شد. نتایج: پروتئین بیان شده با استفاده از آزمون الکتروفورز SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت و با تکنیک وسترن بلاتینگ و استفاده از آنتی بادی های اختصاصی، تائید شد. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب LipL۳۲ با موفقیت در سیستم پروکاریوتی بیان گردید. این پروتئین را می توان در جهت طراحی روش های تشخیصی در عفونت های ناشی از لپتوسپیرا در دام یا انسان مورد استفاده قرار داد.

کلیدواژه ها:

Leptospirosis ، Recombinant Protein ، Cloning ، LipL۳۲ ، Protein expression ، لپتوسپیروزیس ، پروتئین نوترکیب ، آنتی ژن LipL۳۲ ، کلونینگ ، بیان پروتئین