جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی

چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین ۲۸ تا ۴۰ کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(HSCs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta  بود. Rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و روش ها مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلول های Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده­ SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-۳۲a در E.coli TOP ۱۰ همسانه سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت شد. بیان  SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد. یافته ها توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلول های Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-۳۲a همسانه سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد. نتیجه گیری در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئین های یوکاریوتی با کدون های نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می شود.

کلیدواژه ها:

Key words: Glycosylation ، Stem cell ، PCR ، کلمات کلیدی: گلیکوزیلاسیون ، سلول بنیادی ، PCR