بررسی تاثیر بیان همزمان چاپرون های DnaK و DnaJ با کربونیک انیدراز بر میزان حلالیت آن در باکتری E. Coli

در این تحقیق عملکرد چاپرونی DnaK و DnaJ بر روی میزان حلالیت آنزیم کربونیک انیدراز (CA) در یک میزبان بیانی مناسب، با بیان همزمان ژنهای مذکور با ژن هدف بررسی شد. به دلیل استفاده از داروهای مهارکننده آنزیم کربونیک انیدراز در درمان گلوکوم و همچنین تومورهای سرطانی، تولید انبوه این آنزیم در بیوتکنولوژی مدرن مورد توجه است، گرچه تولید انبوه آن در سلول میزبان با مشکلاتی همچون تشکیل اجسام تجمعی1 و غیرفعال مواجه خواهد شد. جهت رفع مشکل میتوان از پروتیینهای کمکی با نام چاپرونهای مولکولی استفاده کرد. در این مطالعه ژن کربونیک انیدراز و ژنهای چاپرونی DnaJ و DnaK از سویه Bacillus cereus با پی سی آر تکثیر شده و پس از T/A کلون، به ترتیب در وکتورهای بیانی pET19b وpET28a کلون شدند و در نهایت به میزبان بیانی E. coli سویه BL21 منتقل شدند . با انجام SDS-PAGE میزان بیان پروتیین ها مورد ارزیابی قرار گرفت، نتیجه حاکی از آن بود که ژن چاپرونی DnaK که نقش اصلی را در سیستم چاپرونی خانواده Hsp70 به عهده دارد، بر روی حلالیت کربونیک انیدراز موثر بوده ولی ژن DnaJ که نقش کمکی را در عملکرد صحیح DnaK در این سیستم چاپرونی بازی می کند، نتوانست به تنهایی بر حلالیت بیشتر این آنزیم تاثیرگذار باشد.

کلیدواژه ها:

کربونیک انیدراز ، بیان هم زمان ، چاپرون های مولکولیDnaJ و DnaK